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中药显微鉴定常见的几种制片方法pdf

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  安徽农业科学,JournalofAnhuiA 责任编辑 常俊香 责任校对 李岩 中药显微鉴定常见的几种制片方法 雷忠萍 ,贺道华 ,曹翠兰 (1.西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌7l2loo;2.西北农林科技大学农学院,陕西杨凌712l00) 摘要 综述了中药显微鉴定常见的制片方法,为中药的真伪、品质鉴定提供 了参考。 关键词 中药;显微鉴定;制片方法 中图分类号 S132 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2011)04—01922—03 SeveralCommon SlicingMethodsofMicroscopicIdentification ofTraditionalChineseDrug LEIZhong—pingetal (CollegeofLifeScience,NorthwestA &FUniversityofScienceandTechnology,Yangling,Shaanxi712100) Abstract ThecommonslicingmethodsofmicroscopicidentificationoftraditionalChinesedrugweresummarizedandthisprovidereferences forauthenticityandqualityidentificationoftraditionalChinesedrug. Keywords TraditionalChinesedurg;Microscopicidentification;Slicingmethods 目前中药鉴定主要包括来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定 剖结构、细胞组织化学成分、植物资源鉴定等 ,同时也是进行 及理化鉴定等4大类 ,显微鉴定是现今 中药材鉴别的主要方 石蜡制片前科学选材的一种常用简易制片方法。该方法有 法之一。中药显微鉴定是利用显微技术对中药进行显微分 利于临时观察、较快地得到结果;其缺点是对于材料体积过 析 ,以确定其品种和质量的一种鉴定方法…。具体来说是利 小、太软、太硬的材料则难于切片 ,同时不能做成连续切片, 用显微镜(包括生物显微镜 、偏光显微镜、扫描 电镜等)观察 不经永久制片处理则不便保存。 药材的组织切片、粉末、内部组织构造、细胞形状及其后含物 根据需要和观察 目的的不同,也可选择特殊的化学试剂 的特征,用以鉴定药材的真伪和纯度 ,甚至品质的一种方法。 进行染色 ,以利观察切片的形态特征。徒手切片经过脱水、 对于仅通过性状不易识别的药材 、性状相近的多来源药 染色、透明、封藏等过程 ,又可做成永久制片。 材或切碎和粉末状态的药材 ,以及用粉末制成的中成药,显 1.1.2 滑走制片法。滑走制片法一般要使用推位式切片 微鉴定尤其重要。制片是显微鉴定的非常重要 的环节。目 机。适用于较硬的材料 ,材料不得经过特殊的处理,若材料 前显微标本片的制作方法极其繁多,根据其原理可分为切片 太软,可用辅助物帮助固定,以利切片。朱华等利用滑走制 法和非切片法,切片法可根据切片时是否需要支持剂分为2 片法观察葡萄科 的白粉藤,看到 了清 晰的根 、茎、叶横切 类:无支持剂切片法 (包括徒手切片法和滑走切片法等)和有 面 ;朱意麟等观察菊科艾纳香属的紫色花,获得 了清晰的 支持剂切片法 (包括石蜡切片法 、冰冻切片法 、火胶棉切片 根、茎 、叶横切面详图 。滑走制片法的缺点是不能切成连 法、明胶切片法、超薄切片法等);非切片法有整体封藏法、粉 续的切片,而且切片 比石蜡切片厚。 末制片法、离析法、表面制片法、磨片法、涂片法等。 1.2 有支持剂切片法 1 切片法 1.2.1 石蜡制片法。石蜡切片是以石蜡为支持剂包埋材 切片法就是用切片刀徒手或借助特定的机械设备将材 料,用切片机切片。其原理是将石蜡渗透到材料 内部的各个 料切成一定厚度的薄片。切片法制片适合对微细结构进行 细胞中,起支持作用,以利于切片机切片。石蜡溶于二甲苯 观察 ,且对比非常明显,对于一般的根、茎、叶、皮等直接做横 但不溶于水或乙醇,二甲苯不溶于水而溶于乙醇,由于细胞 切片即可;果实需作横切和纵切;而木类需观察三维切片(横 内充满水分 ,要使石蜡填充到细胞中,需要用 乙醇取代细胞 切、径向纵切 、切向纵切)。 中的水分,用二 甲苯取代乙醇,再用石蜡取代二甲苯。这样 1.1 无支持剂切片法 石蜡凝固使材料具有一定的硬度便于切片。其制作过程非 1.1.1 徒手切片法。徒手切片法是最早发明也是最常用 常复杂,依次包括:取材,固定 (选择适 当的固定剂),冲洗抽 的切片方法 ,徒手切片是手持剃刀或保安刀片,将新鲜材料 气 ,脱水(各个浓度的乙醇,无水乙醇需要更换 1次),透 明 或预先固定好 的材料 (切前水洗)切成薄片,不经染色或经 (各个浓度二甲苯,纯二甲苯需要更换 1次),浸蜡 (纯蜡要更 简单染色后用水封片作临时观察 ,必要时经镜检后可选择 换 1次),包埋,切片 ,烫片贴片,烘片,脱蜡 ,除二 甲苯,番红 好的薄片经过制片各步骤,制成永存玻片标本供长期使用。 染色,洗涤脱水,固绿染色 ,洗涤脱水,透明,封藏。邓恒青等 关正君等利用徒手切片法对常见生物材料进行制片,在洋 采用石蜡切片法对天麻药材样品及新鲜材料进行了显微鉴 葱根尖切片中获得了非常清晰的线粒体物像 。卢伟等利 定,观察到横切面呈圆形、纵切面呈乳头状凸起的潜伏芽 。 用徒手切片法对一叶草的鲜品药材进行制片 ,获得了清晰的 朱华等采用石蜡切片对湖广草的根 、茎 、叶横切面进行了显 根 、叶物像 。 微鉴定 ,获得了清晰的显微照片…。 此方法不需要复杂的设备,方法简便 ,制片迅速 ,而且能 石蜡制片法的优点是:一般 的材料都适用,可将材料切 观察到植物组织的天然色泽和活体结构,常用于研究植物解 成厚薄均一的薄片,其内部结构更清楚;可切成连续蜡带,观 察细胞和组织的动态发生及层次变化过程 ,制作的切片可长 作者简介 雷忠萍(1979一),女,湖北襄樊人,助理实验师,从事药用植 期保存 ,因此该方法是植物制片技术中应用最广的;此外 ,石 物方面的实验教学工作。 收稿 日期 2010.1】-08 蜡制片还是电子显微镜薄切片和超薄切片的基础,离开了石 39卷4期 雷忠萍等 中药显微鉴定常见的几种制片方法 1923 蜡制片就很难确定 电镜制片样品的位置。其缺点是 :操作程 黄褐毛忍冬花蕾在光镜下的苞片、小苞片、花萼、花冠外表面 序复杂,要求精细,需要时间长 ,操作过程中任何一步出现问 及其粉末的显微特征,并在扫描 电镜下观察 了花冠内、外表 题就会前功尽弃,而且个别操作不当会引起细胞变形或有些 面的特征 。竺叶青等对 中药地榆的粉末进行 了显微鉴 细胞失去内含物,对一些质地过硬的材料也不宜采用;另外 , 定,均取得了较好的观察结果u 。 石蜡制片需要一定的条件和设备。 此法是鉴定中药材最常用的方法之一 ,主要用于鉴别细 1.2.2 冰冻制片法。冰冻切片是利用滑走切片机或旋转切 胞的形态特征。其优点是操作简便快速,经济实惠。但有些 片机,装上特别设计 的冷冻器进行切片,以用于显微观察。 技术难于掌握 ,例如粉末透化是一项基本的专业技能,若掌 该方法以水为支持剂 ,适用于含水分较多的材料。切片时应 握得好 ,切片就清晰,容易观察,若掌握得不好 ,就很难观察 特别注意调节控制温度。谢佩松等总结了冰冻切片技术在 到要找的组织特征。 植物显微结构中的应用,认为冰冻切片过程简单有效且图版 粉末法还可鉴定 由粉末药材制成的成方制剂 ,如丸剂、 清晰,在 1d内可获得高质量图片 。 片剂 ,取2~3片 (丸)研细,滴加一定试剂搅拌均匀,再按粉 冰冻切片技术在动物和人体的研究中应用广泛 ,但在植 末特征鉴别 :蜜丸直接挑取少量样品制片,也可用热水脱蜜 物的研究中却难以推广,仅在少数植物器官和组织切片中应 后制片观察 ;牛黄解毒片、二妙丸、六味地黄丸均可用此法制 用 ,其原因是植物细胞具有细胞壁和大液泡 ,植物细胞 中大 片进行显微鉴别 。 量的水分使植物样品较动物样品更容易在低温冷冻过程中 2.2 整体封固制片法 整体封固法是直接将材料的整体用 形成冰 晶,损伤植物细胞 的细微结构,即 “冰 晶损伤”。另 水、甘油醋酸、水合氯醛等装片观察 。该法制片适合观察体 外,冷冻后的植物样品硬度过大,难以切片和保持植物组织 积小或扁平状的材料,如花瓣 、花萼、柱头或纤细苔藓类 、藻 结构的完整性。万怡震等采用冰冻切片技术对葡萄浆果进 类 、菌类的叶状体或丝状体等。可不经切片操作 ,直接将材 行 了显微鉴定,为进行葡萄浆果色素细胞解剖研究提供 了有 料的整体用水、甘油醋酸或水合氯醛等试液装片观察。另外 效的参考 。焦石等采用冰冻切片技术进行了大豆根部 的 对于花粉粒和孢子要先软化 ,捣碎离心,取沉淀用整体封固 细胞生物学研究,同时通过环节和参数的优化 ,确定 了简便 、 法装片观察。肖安菊采用整体封固法对真伪松花粉进行 了 快速、高效的冰冻切片技术 。 鉴别 ,发现松花粉纯 品为类 圆形花粉粒 ,2侧各有 1个膨大 冰冻切片可缩短常规石蜡切片缓慢而复杂的处理过程 , 的气囊 ,掺伪松花粉的花粉粒与之有极大 区别 “。邓恒青 减少对样品组织结构的损伤,更好的保存生物分子的活性。 等采用整体封固制片法对天麻 的鳞叶进行了显微鉴定,观 同时,该方法具有快速 、简便、易操作等特点,有利于进行细 察到25~100 m草酸钙针晶束和平行排列的维管束(螺纹 胞生物学(如免疫定位)和分子生物学 (如原位杂交)研究。 导管) 。整体封固法与通常采用的石蜡制片法相 比具有 该方法在中药鉴定时主要用来鉴定动物材料 ,在植物类 中药 以下优点:制片的全过程 比较简易,观察可以比较及时;特 鉴定中很少应用。 别是能够保持材料的完整性 。缺点是无法显示组织和细胞 2 非切片法 之间的结构。 非切片法,即用物理或化学的方法,将材料组织分离成 2.3 表面制片法 表面制片主要用于观察叶片、果实和种 单个细胞或薄片,或将整个材料进行整体封藏。非切片法可 子、草本植物茎等 的表皮细胞形状 、毛茸的类型、气孔轴式、 保持生物体或某部分器官组织的原有状态及其完整性 ,但因 角质层角的特征及花瓣 、花被的表面特征等。材料鲜 、干 品 不经过切片手续 ,不仅不能清晰地显示各器官组织之间的相 均可。方法是 :通常用眼科镊子尖端夹于叶片或果实等的表 互关系,更无法显示组织和细胞之问的结构,故应用范围较 面,轻轻撕取其表皮层 ,将撕下的薄片置于载玻片上 ,注意其 窄,多用于生物的形态观察 。该方法主要包括整体封藏法、 上表面朝上 ,然后滴加水、甘油或水合氯醛液 ,最后将其置于 粉末制片法 、离析法 、表面制片法 、磨片法、涂片法等。 显微镜下进行观察。~般来说,下表皮 比较好撕,上表皮由 2.1 粉末制片法 粉末制片法是将药材研细,过筛(50~80 于同栅栏组织结合而较难撕 。关正君等利用表面制片法对 目)后制片的方法。特别坚硬的药材可用锉刀挫成粉末。制 蚕豆叶下表皮进行装片,在显微镜下观察到气孔清晰可见, 备粉末时应注意不得有其他杂物混入 ,样品应全部过筛,不 细胞壁为不规则状 ,细胞核和细胞壁为深绿色 ,细胞质为淡 得留有残渣,过筛后 的粉末需充分混匀方可装片。方法是 : 绿色 。徐国钧等对2O种金银花的花蕾进行 了表面显微观 取粉末少许,置于洁净的载玻片上,滴加 1~2滴蒸馏水或甘 察,发现其腺毛和非腺毛的类型、长短、大小、细胞数等均有 油醋酸试液,加上盖玻片 ,置显微镜下,可观察细胞中的不溶 明显区别 。高敏等利用表面制片法对淫羊藿药典品种 性物质如淀粉粒、脂肪油滴 、色素颗粒等。若要观察细胞 的 进行显微鉴别 ,发现该法可区分5个品种淫羊藿 。 形态特征,则应采用滴加水合氯醛加热透化后装片,以除去 该方法常用于观察具有初生构造的表皮组织 ,撕取或分 细胞中的淀粉 、油脂等 ,增加细胞壁的折光率 ,从而使细胞 的 离表皮以观察其表面特征。其优点是 ,材料干鲜均可,设备 形态更加清晰。为防止水合氯醛结 晶析 出,水合氯醛透化后 简单 ,便于迅速操作 ,所需的试剂药品简单,因而经济适用。 应滴加甘油盖上盖玻片,擦净溢出液即可观察。大部分根 、 缺点是制片不适合长期保存。 茎 、叶、花、果实、根皮、茎皮类中药均可用此法制片观察其组 2.4 解离制片法 解离制片法利用化学试剂使植物药材的 织特征。赵丽芬等对中药红瑞木药材粉末进行显微观察 ,为 组织分离 ,细胞的胞间层溶解 ,细胞互相分离,以便能够完整 其药材的真伪及品质鉴定提供了参考 。冯毓秀等观察了 地观察到细胞 的形状。解离前需要将材料切成 2i/lm 的薄 1924 安徽农业科学 2011生 片,常见的处理方法有3种: [5]朱意麟 ,蔡毅,李杰 ,等.紫色花的显微鉴男U[J].中药材,2OO9,32(1O): l529—1530. (1)氢氧化钾法:适用于药材内薄壁组织 占极大部分,有 [6]邓恒青,周汉华,代蕾.天麻显微鉴定拾遗 [J].中国民族民间医药, 少量木化组织存在的柔软组织 ,如叶、花等。 2009,l8(13):9. [7]朱华,高雅,张可锋,等.湖广草的显微结构研究[J].海峡药学,2o08,20 (2)硝铬酸法 :适用于机械组织多而集结成束或木化程 (9):70—71. 度较高的药材,如木材、根茎、树皮等材料。此法的缺点是解 [8]谢佩松 ,徐中根,韦存虚.冰冻切片技术在植物显微结构和组织化学中 的应用[J].生物学杂志,2oo9,26(3):72—74. 离后的材料不再显木化反应。 [9].万冶震,贺普超.葡萄浆果冰冻切片技术参数的研究[J].西北植物学 (3)氯酸钾法 :适用于坚硬的茎木类及果核类等中药。 报 ,20Ol,21(2):382—386. 解离制片法适用于研究细胞的立体结构 ,尤其适用于观 [1O]焦石,段玉玺,孙华,等.大豆根部冰冻切片最佳方法试验[J].湖北农 业科学,2009,48(4):806—808. 察导管、管胞 、石细胞和纤维等增厚壁的状况。陈永林等 [11]赵丽芬,于砚青,于加宾.红瑞木粉末的显微鉴定[J].中医药信息, 利用解离制片法观察了大粒紫苏子的形态,发现其基本构造 2030,17(2):8. [12]冯毓秀,朱兆仪.黄褐毛忍冬花蕾的生药研究[J].中国药学杂志, 与小粒紫苏子相同,但内果皮石细胞有 3种类型:①顶端具 1991,26(12):716. . [13]竺叶青,施大文,李自力,等.中药地榆的性状及显微鉴定[J].上海医 栅状分枝的异形石细胞,但较大;②顶端无栅状分枝的异形 科大学学报 ,1993,20(6):458~463. 石细胞 ;③长方形或类方形且腔较大的规则石细胞。解离制 [14]肖安菊.松花粉掺伪鉴别 [J].黄石理工学院学报,0210,26(2):41— 片法的优点是 :可将细胞 的立体结构观察清楚,操作周期较 42. [15]徐国钧,徐珞珊 ,牛燕珍.中药金银花的鉴定研究I[J].南京药学院学 短,但要用到强酸强碱试剂 ,操作时应特别注意安全。 报 ,1979,14(1):R2—87. 2.5 磨片法 矿物药除可直接粉碎成细粉制片外 ,还可制 [16]徐国钧,徐珞珊,牛燕 中药金银花的鉴定研究Ⅱ[J].南京药学院学 报 ,1981,16(1):1—5. 成磨片。首先在磨片机上将样品的一面磨平,用加拿大树胶 [17]高敏,冯学锋,郭宝林,等.淫羊藿药典品种显微鉴别研究[J].中国中 把磨平面粘在载玻片上,然后磨另一面,磨片近30 m时进 药杂志,2OO9,34(23):3123—3125. [18]陈永林,赵华英,许欣荣,等.苏子的显微鉴定研究[J].中草药,1998, 行精磨和抛光 ,镜检合格后进行封藏制片观察。牛超群 92(5):338—339, 等 采用磨片技术对药用矿物蒙脱石的显微结构进行 了观 [19]牛超群,于森,张秋颖,等.药用矿物蒙脱石的电子显微镜分析 [J].中 国药学杂志,2005,40(16):1202—1222. 察,为蒙脱石的分析鉴定和药用价值研究提供了理论依据。 3 小结 [02]LIUT,LIUZY,HEDX,eta1.StudyongerminationrateofUnearia rhynehophylla(Miq.)jacks[J].AgriculturalScience&Technology,2OO8. 综上所述,中药的显微鉴定制片方法很多,但每种方法 9(4):96-98,117. 都有其局限性。鉴别时要选择有代表性的样品,根据不同的 [21]巴音吉日嘎拉,巴雅尔,石荷叶.中药葛根素对小白鼠乳腺组织形态 结构的影响[J].畜牧与饲料科学,20O7,28(1):30—31. 鉴定对象和 目的,采用相应的制片方法 ,以便达到最好的鉴 f22lKONGL.JUYL.ScreeningofChinesemedicineresistingNeosporacani. 定效果。 nunwithELISA[J].AgriculturalScience&Tcehnology,2OO8,9(6):102 — 103. 参考文献 [23]达来,刘连发,温双柱.鸡传染性法氏囊病的中药治疗 [J].畜牧与饲 [1]康廷国.中药鉴定学 [M].北京:中国中医药出版社,0203:36. 料科学,20O9,30(2):163. [2]关正君,霍艳林.常见生物显微制片方法的比较研究[J].安徽农业科 124IPANGXH,CHUXL,SUJQ,eta1.Screeningandefficacyobservationof 学,2006,34(I1):2395—2396. traditionalChinesemedicineagainstchickenpathogenicEsehefiehiacoli [3]卢伟,陈晟玮,董 台.一叶草的性状及显微鉴别[J].福建中医学院学 [J].AgriculturalScience&Tcehnology,2OO9,10(1):140—144. 报,2009,19(3):10—13. [25]刘立超,吕点点,李先磊.高通量筛选在中药研究中的应用 [J].畜牧 [4]朱华,赵旭,高雅 ,等.白粉藤的显微鉴别研究[J].辽宁中医药大学学 与饲料科学,2OO9,30(4):19. 报,2O09,11(11):13—14. (上接第 1921页) 、 品工业,1996(4):02 —21 [7]罗贵民.酶工程 [M].北京:化学工业出版社,2003. 『l6]YANGPZ,JIANGST,PANLJ,eta1.Effectsofultrasound/dilute [8]杨传强,龙德树.纤维素酶的活性测定及其影响因素[J].天津纺织工 H2SO4pretreatmentoneellulaseaetivityofeom straw liquidferment~ion 学院学报 ,1999,4(4):31—35. [J].AgriculturalScience&Technology,20O9,10(6):02—22. [9]曹永范,张冬艳,王丽,等.稀土离子对纤维素酶活性的影响[J].内蒙 [17]李荣杰.纤维素酶高产菌的分离筛选与培养基优化 [J].畜牧与饲料 古工业大学学报 ,2009,11(29):104~106. 科学 ,2OO9,30(6):9一l1. [10]颜 日祥,赵小莉.化学因素对纤维素酶活性的影响[J].西北大学学 『181ZHANGM,YANGMM,CHENW Q.eta1.Studyon h【epotentialof 报 ,1992(22):105—107. wheatstrawfiberinChina[J].AgrieuhurMScience&Tcehnology,2O08,9 [11]NINAA,MAKIAI,ANUS,eta1.ACEIofTriehodermareeseiisare— (5):70-73. pressorofcelluloseandxylanaseexpression[J].AppliedandEnviron— [19]吴桐忠,钟发刚.饲料中添加纤维素酶发酵活干菌制剂对黑羽乌骨鸡 mentalMicrobiology,2003,69(1):56—65. 生产性能和营养物质消化利用率的影响 [J].畜牧与饲料科学,2OO9, [12]阚国仕,苗青,曹松屹,等.纤维素酶的固体发酵生产及其应用研究 30(6):48. [J].辽宁农业科学,2005(5):44—45. 2『0]WANGJ UY,WANGYS,eta1.Cultureinvitronaderyopreservation [13]崔洪斌,金滨铎,徐涛,等.纤维素酶水解玉米芯的研究[J].食品与机 ofShouguangblackchickenfibroblasts[J1.AgriculturalScience&Tech— 械,2004,20(3):9—10. nology.2008.9(6):136—141. [14]杨吉霞,蔡俊鹏,祝玲.纤维素酶在中药或分提取中的应用[J].综述, [21]丁立孝,张青,孙琴,等.瘤 胃厌氧真菌对木质纤维素降解的研究进展 2005,28(1):64—67. [J].畜牧与饲料科学,0210,31(1):16—18. [15]万曰余,硕岱芳.纤维素酶在草莓汁生产中的应用[J].冷冻与速冻食

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